【48812】测叶绿素的办法
产品简介: 叶绿素含量的测定办法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。不过现在使用最为广泛的仍是分光光度法。 叶绿素提取液的吸收光谱标明:有两个强吸收峰,分别在红光区和蓝紫区,不同提取溶剂和质料所得的叶绿素溶液的吸收光谱比较类似。叶绿素a、叶绿素b的红区最大吸收峰分别在663nm、645nm邻近,在蓝紫区别别为429nm、453nm邻近。因为提取溶剂和质料
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叶绿素含量的测定办法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。不过现在使用最为广泛的仍是分光光度法。
叶绿素提取液的吸收光谱标明:有两个强吸收峰,分别在红光区和蓝紫区,不同提取溶剂和质料所得的叶绿素溶液的吸收光谱比较类似。叶绿素a、叶绿素b的红区最大吸收峰分别在663nm、645nm邻近,在蓝紫区别别为429nm、453nm邻近。因为提取溶剂和质料不同,对叶绿素提取液进行光谱扫描后,所得的最大吸收值可能有较小规模的起浮。
高效液相色谱(HPLC)定量检测叶绿素含量准确率较高,效果很好。用甲醇和丙酮作为活动相,体积比为80:20时,一起在活动相中参加质量分数为0.1%的冰醋酸,流速为1.0mL/min。使用每一种色素的色谱峰面积进行定量,叶绿素a、叶绿素b的定量可通过外标法由作业曲线]
在活体植物中,叶绿素得到了很好的维护,既能发挥光合效果,又不会发生降解。但离体叶绿素对光照很灵敏,光和氧气效果可导致叶绿素不可逆的分化。在自然条件或以胶态分子团存在的水溶液中,叶绿素在有氧的条件下,可进行光氧化而发生自由基,因而一些研讨人员以为叶绿素的光氧化降解必需有氧分子参加,并且其降解速率随氧分子浓度的升高而加速。单线态氧和羟基自由基是叶绿素光化学反响的活性中间体,可与叶绿素吡咯链效果而进一步发生过氧自由基和其他自由基,终究可导致卟啉环和吡咯链的分化既而形成色彩的褪去。当然影响光氧化的要素有许多,比方系统中的水分、温度、光照时刻、光照强度、光的波长规模等等,在这些影响要素中主要有光照时刻、光照强度、光的波长规模、氧的浓度。现在在此方面的研讨大多散布在在自然光(复合光)对色素的影响并且大多数研讨不是很深人。关于单色光(不同波段的光)对叶绿素稳定性的影响研讨方面的报导却较少。
已有研讨标明,叶绿素酶是一种糖蛋白。叶绿素酶催化叶绿素结构中的植醇键而水解生成脱植叶绿素,是叶绿素降解中的要害酶。叶绿素酶是以叶绿素作为底物的,它是一种酯酶。脱镁叶绿素也是叶绿素酶的底物,酶促反响的产品是脱镁脱植叶绿素。叶绿素酶的最适反响温度在60~80℃规模,试验证明,叶绿素酶在80℃以上其活性下降,100%时已彻底失活。
一些研讨标明,叶绿素提取液在不同受热温度下,其降解速率曲线有显着的拐点,叶绿素在80℃以下,降解速度较慢,90℃以上降解速度急剧加速。整体而言,跟着温度的升高,叶绿素降解的速率是逐步加速的,仅仅较低的温度下降解速率不显着。